本文標(biāo)題："國產(chǎn)觀察生物細(xì)胞分析測量光學(xué)顯微鏡-上海光學(xué)儀器一廠"

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軟體基本操作（Single Scan）：

(一)初步掃瞄分析：進(jìn)入軟體后，可看見如下圖所示之控制區(qū)。

1.先點(diǎn)選”Acquire”，再點(diǎn)選”Beam”，之后會(huì)出現(xiàn)一”Parameter Setting”

的視窗，

各項(xiàng)重要欄位說明如下：

A：此區(qū)域是顯示電腦中已有的設(shè)定檔案，其中紅色 L 標(biāo)記的是系統(tǒng)

預(yù)設(shè)值，通常都是選用預(yù)設(shè)值檔案即可，例如樣本有 FITC 及

TRITC 兩種螢光物質(zhì)，就選擇檔案中的”L FITC_TRITC”即可，

此時(shí)系統(tǒng)就會(huì)自動(dòng)將激光開啟至適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度以及調(diào)整適當(dāng)?shù)墓?/div>

譜范圍。另外藍(lán)色 U 標(biāo)記的是使用者的設(shè)定值，可由使用者自行

修改存檔（預(yù)設(shè)值則是無法修改存檔）

B：顯示所開啟的激光波長及強(qiáng)度，可視情況做調(diào)整。

C：紅色框框中，藍(lán)、綠、黃及紅線各是標(biāo)示出激光激發(fā)波長，而虛

線則是螢光釋放波長。

D：光譜范圍調(diào)整區(qū)，可依照需求作調(diào)整。

E：將”Active”勾選，即是選用螢光感測用 PMT。

F：穿透光感測用 PMT。

G：由于掃瞄所得之圖片是黑白的，所以必須要套色才能更明顯顯現(xiàn)

出樣本的螢光分佈，可以點(diǎn)選此區(qū)進(jìn)行套色，一般第一次掃瞄

時(shí)，為了得到正確的螢光亮度，會(huì)先選擇”Glow(O)”，訊號(hào)若太

強(qiáng)的區(qū)域就會(huì)顯現(xiàn)藍(lán)色，此時(shí)調(diào)整 PMT 的大小或是激光的強(qiáng)

度，直到圖像中所有的藍(lán)色區(qū)域剛剛好不見為止，此時(shí)訊號(hào)強(qiáng)度

較為適當(dāng)。

H：以上所有的設(shè)定值設(shè)定完畢后，若常需使用類似之設(shè)定值，可點(diǎn)

選此鈕進(jìn)行存檔，存檔后就可以在 A 區(qū)的”User”中看到檔案，下

一次工作時(shí)點(diǎn)選該檔案即可進(jìn)入自己所設(shè)定之狀態(tài)。

2.以上設(shè)定完成后，即可點(diǎn)選控制區(qū)中的”Singal Scan”，進(jìn)行掃瞄。

得到的結(jié)果會(huì)出現(xiàn)在右邊的螢?zāi)唬ㄓ跋裾{(diào)控視窗）上，如下圖。

3.影像調(diào)控視窗預(yù)設(shè)值是只顯示一個(gè)掃瞄結(jié)果畫面，如欲觀察兩種以

上的螢光，則需增加其他畫面，方法是點(diǎn)選調(diào)控視窗左側(cè)之選擇鍵

Ch1~3，數(shù)字代表畫面的數(shù)目；另有一個(gè)選擇鍵為 Overl.，功能是

將 CH1~3 進(jìn)行疊合，并將結(jié)果顯示在第四個(gè)畫面（右下角）。

3D series / 連續(xù)斷層影像擷取及制作

擷取

1. 基本設(shè)定完成且可掃瞄后,始可使用連續(xù)掃描

2. 連續(xù)掃描時(shí), 調(diào) Z-焦距, 找出上點(diǎn), 在 Begin 按一下

3. 再找出下點(diǎn), 然后在 End 按一下

4. 后又于連續(xù)掃描框內(nèi)按一下

5. 再選切片數(shù)目, 平均數(shù)目, 按 Series 光切掃描.

6. 連續(xù)掃描完成,儲(chǔ)存檔案

可配合

Averaging以消

除雜訊

每一切片的影像

要做平均處理

嗎 ?

決定光切數(shù)目

Z-focus

PMT Gain 1/2/3/4

Pinhole

Zoom

Page 13

制作

1. 點(diǎn)選3D,再點(diǎn)選Projection & Animation

2. 開啟連續(xù)掃描檔

3. 設(shè)定各個(gè)參數(shù)

4. 點(diǎn)選Prev察看結(jié)果

5. 若結(jié)果滿意即可點(diǎn)選Apply,并將結(jié)果存檔

Page 14

Timelapse / 長時(shí)間掃描記錄

♦ 點(diǎn)選 Mode,再點(diǎn)選有 t 參數(shù)之選項(xiàng)目

♦ 依據(jù)所選之選項(xiàng)設(shè)定所須之參數(shù),點(diǎn)選 Apply

Line-Mode „xt“ Configuration

Stack-Mode „xyt“ Configuration

Stack-Mode „xyzt“ Configuration

Page 15

如何去除 cross talk

1. λ scanning (Lambda Scanning)

# 選擇要測試的螢光物質(zhì)吸光范圍 (e.g. FITC)

# λ beg. 500nm; λ End 700nm

# 在此波長范圍內(nèi), 選擇要掃描幾次 (λ Step)

# 分析

選擇Quantify Pr (Z), 知道高吸收波長落于何處, 可作為選取吸收波長范

圍之依據(jù)

# 注意事項(xiàng)

此功能一次僅能做單一波長校正

Page 16

2. Sequential Scan

# 利用 λ scan 訂出佳吸收波長后, 將 condition 儲(chǔ)存

# 勾選 Sequential Scan 選項(xiàng)

# 將儲(chǔ)存的 condition 檔依需要拖曳至下方

# 選擇 between frames

# 點(diǎn)選 series 按鍵開始 scan

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