本文標(biāo)題："芽胞染色使用的菌種需要注意菌齡"

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莢膜染色法

目的

原理

材料與儀器

步驟與方法

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

目的

內(nèi)孢子為某些革蘭氏陽(yáng)性菌為適應(yīng)外在惡劣環(huán)境時(shí)所產(chǎn)生的一種結(jié)構(gòu)，可在細(xì)菌鑑別中當(dāng)作一種分類(lèi)上的依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)旨在教導(dǎo)學(xué)生瞭解內(nèi)孢子染色之原理，

并學(xué)習(xí)其染色法，以區(qū)別細(xì)菌內(nèi)孢子與生長(zhǎng)細(xì)胞有何不同之處。

原理

使用初染劑－孔雀石綠，在加熱條件下進(jìn)行染色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入內(nèi)孢子。接著將進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗使其脫色，

而內(nèi)孢子經(jīng)染色后因難以被水洗去，故再用複染劑染色后，內(nèi)孢子仍會(huì)保留初染劑的顏色，而菌體則會(huì)被染成複染劑的顏色，使內(nèi)孢子和菌體易區(qū)分。

材料與儀器

菌種

染劑

設(shè)備儀器及其他用具材

菌種

培養(yǎng)48小時(shí)之Bacillus subtilis

染劑

5%孔雀石綠

0.5%番紅

設(shè)備儀器及其他用具材

酒精燈

接種環(huán)

玻片

顯微鏡

濾紙

步驟與方法

此染色方法之操作流程如下：

制備樣本玻片：準(zhǔn)備一乾淨(jìng)之玻片，先滴入1~2滴蒸餾水于戴玻片上，接著使用經(jīng)火滅菌并冷卻之接種環(huán)將培養(yǎng)48小時(shí)之Bacillus subtilis菌種液取出，并與其充分混合后，制備成樣本玻片，并短時(shí)間在酒精燈上火烤加熱固定。

初染：將樣本玻片滴上孔雀石綠染劑并使其完全覆蓋于玻片標(biāo)本上，接著將玻片以酒精燈火烤方式，再加熱數(shù)分鐘。加熱過(guò)程中應(yīng)輕輕搖晃玻片樣本，為避免使孔雀石綠染劑蒸乾，亦可適時(shí)補(bǔ)充染劑（圖5-1(A)）。

脫色：將加熱過(guò)后之玻片置于室溫中冷卻后，以蒸餾水清洗掉多馀的染劑

複染：滴上番紅染劑進(jìn)行複染，約30秒

水洗：再以蒸餾水輕輕沖洗掉多馀的染劑

顯微鏡觀察：將玻片風(fēng)乾或以濾紙輕輕擦乾水分后，于顯微鏡觀察細(xì)菌中內(nèi)孢子型態(tài)。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

芽胞染色使用之菌種應(yīng)注意菌齡。

欲制備出好的玻片，在取菌時(shí)，應(yīng)用接種環(huán)先充分?jǐn)嚢瑁缓笤偬羧【海駝t菌體沈淀于管底導(dǎo)致涂抹時(shí)菌體太少。

染色過(guò)程中，可用玻片夾夾住載玻片邊緣，以避免手指被染劑沾染。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

請(qǐng)畫(huà)出Bacillus subtilis經(jīng)染色后所呈現(xiàn)之型態(tài)，并描繪內(nèi)孢子于細(xì)菌中生長(zhǎng)之位置與形狀。

預(yù)期結(jié)果：芽胞應(yīng)呈藍(lán)綠色，菌體則為紅色。

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