本文標題："煙草花葉TMV提純的方法是什么"

煙草花葉TMV提純的方法是什么

在研肉器中研磨冰凍的煙草病葉，把汁液和漿法收集在燒杯里，通

過紗布排出汁液并盡量從槳渣中擠出汁液。每擠出100毫升的汁液加30

毫升的0.3M Na2HPO,到漿渣中，充分混和之后再研糜漿渣并通過紗布擠

出汁液。把這抽出液加到原始的汁液中。汁液在4000轉I分的速度下離心

20分鐘。

對于征100毫升的上層汁液加25克(NH,) 1804,同時攪動使鹽溶解。讓

溶液停大約半小時，然后離心出含有病毒的沉淀物。振50毫升原始汁液的

沉淀物加3毫升水，攪動幾分鐘。隨后在400轉l分的速度下進行15分鐘的離

心作用。把所有離心管的上層液體合并起來。連續(xù)用水提取4到5次，用水量

要小到合并的上層液體總容量只有原始汁液的大約四分之一。摒棄殘留的沉

淀物。向合井的上層液里面緩慢加入NaOH，同時強烈攪動，把PH調(diào)到6.5為

止。再以每100毫升25克的比例加人(NH4)2S04。把沉淀物(病毒)離心出來，

摒棄上層液體。用少水提取4至5次使病毒重新溶解如前，加1%HC1到合并

的上層液中，把pH調(diào)到3.3,0止大約半小時，然后離心出沉淀的病毒。

把沉淀物浮懸在大約10毫升水中，并在自來水下透析1至2夭。由千鹽酸從

透析袋擴一散出來，PH將升高而病毒將再溶解。某些植物材料將保持不溶解

狀態(tài)，并須通過離心予以摒除。上層液體可保存在冰箱里并用為提純的煙草

花葉病毒。

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